ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

 

1. Изучить культуральные свойства бактерий, вырос-

ших на МПА после посева методом Дригальского. Обра-

тить внимание на изолированные колонии имеющие S- и

R-формы.

2. Изучить культуральные свойства колоний золо-

тистого стафилококка. Приготовить из них препараты,

окрасить по Граму, определить тинкториальные свойст-

ва золотистого стафилококка.

3. Изучить культуральные свойства бактерий, вырос-

ших на агаре Эндо. Обратить внимание на красные коло-

КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ

349

 

нии с металлическим блеском. Приготовить из них пре-

параты, окрасить по Граму, определить тинкториальные

свойства кишечной палочки.

4. Сделать посев-отпечаток пальцев рук всех студен-

тов группы на поверхности МПА в чашках Петри с це-

лью контроля количества и качества микрофлоры кожи

рук, обратить внимание, что все эти бактерии могут

быть источником загрязнения поверхности пищевых

продуктов, к которым прикасаются руки.

 

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

 

1. С какой целью изучают культуральные свойства микро-

организмов?

2. Опишите культуральные свойства бактерий на плотных

питательных средах.

3. Опишите культуральные свойства бактерий на жидких

питательных средах.

4. Перечислите все признаки, по которым определяют вид

бактерий.

Тема 8

 

ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ
(БИОХИМИЧЕСКИЕ)

СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ

 

 

Цель занятия. Освоить методы изучения ферментативных

(биохимических) свойств микроорганизмов, таких как сахаро-

литические, протеолитические.

Материалы и оборудование. Набор сред Гисса (или корот-

кий пестрый ряд) с демонстрационными посевами бактерий

кишечно-тифозного семейства; агар Эндо с посевом кишечной

палочки и сальмонеллы, колонии которых в виде слов E. coli

и Salmonella написаны бактериологической петлей, содержа-

щей соответствующую культуру. Бактериологические петли,

спиртовки. Набор красок для окраски по Граму, предметные

стекла, иммерсионное масло, микроскопы.

Таблицы. Биохимическая дифференциация бактерий ки-

шечно-тифозного семейства, среды Гисса (короткий и длин-

ный пестрый ряд).

 

К настоящему моменту вы знакомы с шестью при-

знаками бактерий, при помощи которых можно опре-

делить вид. Но мир микроорганизмов так сложен, что

разные виды микроорганизмов обладают одинаковыми

морфологическими, тинкториальными, культуральны-

ми признаками, и иногда только по набору ферментов,

генетически закрепленных за каждым видом, их можно

дифференцировать друг от друга.

дуктов (СО , H ).

средах Гисса с различными углеводами);

свертывание молока);

туры. Наличие фермента определяется:

ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ (БИОХИМИЧЕСКИЕ) СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ

351

 

Ферментативные свойства — это способность бакте-

рий при помощи ферментов расщеплять сложные орга-

нические соединения. Каждый вид микроорганизмов

синтезирует определенный набор ферментов, эта способ-

ность генетически закреплена, поэтому по наличию или

отсутствию фермента можно определить вид микроорга-

низмов. Для изучения ферментативных свойств микро-

организмов готовят питательные среды строго опреде-

ленного состава, в которые бактериологической петлей

вносят изучаемые микроорганизмы в виде чистой куль-

 

 по изменению физического состояния питатель-

ной среды (разжижение МПЖ, наличие пузырь-

ков газа в поплавках или в полужидкой среде,

 

 по изменению рН в дифференциально-диагности-

ческих средах (агаре Эндо, Левина, Плоскирева,

 

 по изменению цвета индикаторных бумажек при

образовании конечных газообразных продуктов

(сероводород, индол, аммиак).

Сахаролитические свойства бактерий изучают на пи-

тательных средах, в состав которых входит какой-либо

углевод и индикатор.

Для изучения сахаролитических свойств применя-

ют жидкие (среды Гисса) и плотные питательные среды

(среды Эндо, Левина, Плоскирева). Бактерии, имеющие

определенные ферменты, расщепляют углеводы, выс-

шие спирты до альдегидов, кислот и газообразных про-

2

2

В жидких питательных средах образование кислоты

устанавливают по изменению цвета индикатора, а появ-

ление газа — по пузырькам газа в пробирках-поплавках

и в глубине полужидкого агара.

При отсутствии ферментации углевода цвет среды не

меняется. Поскольку бактерии ферментируют не все,

а только некоторые углеводы, входящие в состав сред

Гисса, наблюдается довольно пестрая картина. Поэтому

352

ТЕМА 8

 

набор сред с углеводами и цветным индикатором был на-

зван пестрым рядом.

На плотных дифференциально-диагностических сре-

дах, в состав которых входят углеводы и индикатор, вы-

растают колонии, имеющие различную окраску. Напри-

мер, кишечная палочка, ферментирующая лактозу до

молочной кислоты, которая изменяет рН в кислую сто-

рону, на агаре Эндо образует красные колонии, а саль-

монеллы, не имеющие фермента лактазы, — бесцветные

колонии.

Особенно важно изучение сахаролитических фермен-

тов при дифференциации бактерий кишечно-тифозного

семейства, например представителей родов Salmonella и

Escherichia. Бактерии этих родов не отличаются друг от

друга по первым шести признакам: все палочки, грамо-

трицательные, спор и капсул не образуют, подвижны (за

исключением S. pullorum-gallinarum), культуральные

признаки на МПА и МПБ тоже очень сходные. И только

по седьмому признаку, по набору ферментов, их можно

дифференцировать друг от друга и даже определить вид

(табл. 6).

Таблица 6

Дифференциация бактерий кишечно-тифозного семейства
               в средах Гисса (короткий пестрый ряд)

 

Виды бактерий

 

Глюкоза

 

Лактоза

 

Сахароза

 

Маннит

E. coli

КГ

КГ

—

КГ

S. enteritidis

КГ

—

—

КГ

S. typhi

К — — К

Примечания. КГ — кислота и газ; К — кислота; «—» — нет

изменений.

 

Из таблицы 6 видно, что только у кишечной палочки

имеется фермент, расщепляющий лактозу до кислоты и

газа, эта особенность используется для дифференциации

эшерихий от сальмонелл в среде Эндо, Левина, Плоски-

рева, а также при санитарно-микробиологическом ис-

следовании пищевых продуктов — в среде Кесслера.

каторной бумаги, которая синеет;

щавелевой кислотой;

1–3 сут:

ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ (БИОХИМИЧЕСКИЕ) СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ

353

 

Протеолитические свойства бактерий изучают на

средах, в состав которых входят белки — МПЖ, МПБ,

молоко.

Под действием протеолитических ферментов молоко

свертывается, а в дальнейшем в результате глубокого

расщепления компонентов молока происходит пептони-

зация и сгусток просветляется.

Посев изучаемых бактерий делают уколом в глубину

столбика МПЖ. Посевы не ставят в термостат и наблю-

дают за появляющимися после посева изменениями

5–7 дней при комнатной температуре, при этом изуча-

ют не только разжижение среды, но и его особенности.

Под действием протеолитических ферментов разжиже-

ние может происходить на поверхности в виде воронки,

если это аэробные, и в глубине — если это анаэробные

бактерии.

При глубоком расщеплении белка до конечных про-

дуктов выделяются индол, аммиак, сероводород. Для

выявления этих газов над засеянной средой между

стенкой пробирки и пробкой фиксируют индикаторную

бумагу, посевы выдерживают в термостате в течение

 

 для обнаружения индола индикаторную полос-

ку, пропитанную насыщенным раствором щаве-

левой кислоты, фиксируют над посевом в МПБ.

При выделении индола на 2–3-й день после по-

сева нижняя часть полоски бумаги приобретает

розовый цвет, в результате соединения индола со

 

 для обнаружения аммиака над посевом в

 

МПБ

фиксируют розовую лакмусовую полоску инди-

 

 для обнаружения сероводорода над посевом в

МПБ фиксируют полоску бумаги, пропитан-

ную уксуснокислым свинцом. При взаимодей-

ствии сероводорода и уксуснокислого свинца

бумага чернеет за счет образования сернистого

свинца;

354

ТЕМА 8

 для определения фермента каталазы:

 

бакте-

риальную массу снимают с поверхности агара

бактериологической петлей и суспендируют на

предметном стекле в капле 3%-ного раствора

перекиси водорода. Если изучаемая культура

выделяет каталазу, в капле появятся пузырьки

газа.

Ферментативные свойства — это седьмой признак,

изучаемый при определении вида бактерий.

Таким образом, мы изучили семь признаков, по ко-

торым можно определить вид микроорганизмов. Методы

изучения всех семи признаков очень громоздкие, дли-

тельные, а современные темпы не позволяют останавли-

ваться на достигнутом. В настоящее время предложено

много усовершенствованных методов определения вида,

при изучении темы 10 «Серологические методы диагно-

стики и инфекционных болезней» мы познакомимся с

реакцией агглютинации на предметном стекле, позволя-

ющей быстро определить вид бактерий.

 

 

ЗАДАНИЯ